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徠卡生物顯微鏡關于組織塊的體積

更新時間:2020-01-06 點擊量:1770
  徠卡生物顯微鏡到目前為止,冰涼固定,冰凍超薄切片及冰凍干操是組織及細胞x線微區(qū)的常規(guī)方法。對該方法的細節(jié)做以下幾點說明:
 
  徠卡生物顯微鏡有聚光鏡的則可將聚光鏡作上下移動使其亮度適中,另外也可以改變可變光闡的孔徑以達到適中9b亮度。如果光線太陽時,則可將聚光鏡作適當的向上升,可變光鬧的孔徑作適當的放大。如果光線太強則可將聚光鏡作適當的下降,可交光閏的孔徑作適當的減小。假如在這種情況下還感到刺眼,那末可選用適當的濾光片放置在聚光鏡下的托架上。這柞就能獲得使你滿意的亮度。當然在調節(jié)聚光鏡的上下位置利可變光閱的孔徑大小以及選用適合的濾光片,那是要經過一定時期的實踐而取得經驗的。
 
  徠卡生物顯微鏡一個非常重要的問題是在取材和分離細胞過程,冰凍干燥和樹脂包埋(FD)后冰凍超簿團片后,冰凍干燥后細跑各部位65元素成分含量中必須處理十分仔細,絕不能損傷待觀察分析的細胞。因為作x線微區(qū)分析不但步驟繁多,而且成本甚高,如果經過長時間及多步驟的處理后,所分析的細胞是受損傷的細胞或死細胞,得出錯誤的結論是非常遺憾的。如經過膠元酶處理分離出的心肌細胞有兩種形態(tài),一種是長桿狀,另一種是圓形。后者是在細胞分離過程中受損傷的瀕死細胞。
 
  這兩種細胞中電解質的含量及分布十分不同。圓形心肌細胞中Na甚高而K極低,線枝體中的ca濃度十分高。經過與其它分析方法核對,證明圓形細胞高Na低K及線粒體內高ca是由于在細胞分離過程中細胞膜受損傷的結果。細胞及組織的冰涼固定方法往往是先采取淬冷固定,然后放入液氮中保存。淬冷固定對于保存的效果十分重要。活細胞或新鮮組織中富含水分,當淬冷時往往是細胞或組織與碎冷劑(特別是用液氮粹冷時)直接接觸的部位先冷凍固定,因而形成一個“殼”,便妨礙了細胞的中心部位碎冷固定。因此在作x一線微區(qū)分析時,常常發(fā)現較大的細胞的中心部位有冰晶存在。為了防止這種情況發(fā)生,便使用熔點比液氮高但低干一806c的物質作碎冷劑。這類物質很多,但zui易獲得,價格低廉的是濃態(tài)丙烷(沸點一42.120c,熔點一187.10c,分子量44.1),冷卻速度也zui快。但其缺點是易燃。
 
  可將肌纖維放在一特制的架上,使該肌纖維收縮達到某時相需要固定時,立即啟動噴咀,使液態(tài)丙烷向肌纖維噴射,使之淬冷固定。然后再將肌纖維連同架子取出投入液氮中。如果固定血細胞或分離的細胞,首先低速離心使細胞集中,將細胞轉移到一個導熱性能良好的銀質小管中、將該小管放入液態(tài)丙烷中獰冷固定。Hall實驗室固定大鼠胰腺時,先將兩鋼塊用液氦(或液氮)預冷,用鉗夾住兩銅塊將其放在胰腺前后,使姨腺淬冷固定。組織或細胞淬冷固定后轉移到液氮中可長期保存。
 
  徠卡生物顯微鏡除目前zui推崇的冰凍超薄切片法外,在這里再介紹一種科學家們用過的沉積技術。在進行分析前加入一種物質,使之與待分析的成份形成沉積物以固定它,然后分析該沉積物。例如,人們常用草酸鹽與焦銻酸鹽去沉積肌細胞中的ca。前者對胞漿中低濃度的ca敏感性不夠高;焦銻吱鹽的敏感性高些,可與腦漿中游離ca形成電子致密的沉積物,但焦銻酸鹽與鈉、錳、鋇、鐵也形成沉積物,特異性較差。標本制備過程類似于普通透射電鏡超薄切片標本的制備,不同之處在于固定前3%焦銻酸鉀(磷酸鹽緩沖液,pH7.6)固定6小時,在染色的肌肉超薄切片上,在每個肌節(jié)的A帶和2帶的中線可見黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射線微區(qū)分析。曾用二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸(DAB)去沉淀含血紅素的物質等等。這種組化的沉淀反應與x射線微區(qū)分橋聯(lián)合應用在不具備冰凍超薄切片條件的實驗室可考慮采用。根據待分析元素的峰高可做半定量。
 

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